案例应用丨使用WOLF G2分选诱导多能干细胞

发布日期:2024-11-05



诱导多能干细胞(iPSCs)与胚胎干细胞(ESCs)在分化和增殖等许多方面具有相同的特性。在科研中,iPSCs比ESCs更具优势,部分原因是它们不受科学界的伦理约束。山中伸弥(Dr. Shinya Yamanaka)在2006年实现了基于外源因子将体细胞重编程为类似胚胎干细胞的多能状态。山中的发现促成了当前的iPSC技术;此外,iPSC技术还帮助解决了基础生物学、再生医学、药物发现以及食品科学等领域研究的伦理问题。



诱导多能干细胞(iPSCs)与胚胎干细胞(ESCs)在分化和增殖等许多方面具有相同的特性。在科研中,iPSCs比ESCs更具优势,部分原因是它们不受科学界的伦理约束。山中伸弥(Dr. Shinya Yamanaka)在2006年实现了基于外源因子将体细胞重编程为类似胚胎干细胞的多能状态。山中的发现促成了当前的iPSC技术;此外,iPSC技术还帮助解决了基础生物学、再生医学、药物发现以及食品科学等领域研究的伦理问题。



表面抗原的荧光抗体可作为验证干细胞是否保持多能性的指标,本次实验中我们使用了细胞表面标记物SSEA-4(Stage-specifi c Embryonic Antigen-4)和TRA-1-60-R(Tumor-related Antigen-1-60),细胞分化后,SSEA-4和TRA-1-60-R的表达都会下调。


分选前,约6%的细胞样本为死细胞(下图)。



约69%的细胞对SSEA-4和TRA-1-60-R为阳性(下图)。


使用SSEA4+TRA160+(右上角象限)门对两种表面标志物均阳性的细胞进行分选后,双阳性细胞增加到93%(下图)。



并且排除掉了大部分死细胞(下图)。



分选后样本培养24小时后显示的单个细胞(下图A)。培养5天后的iPSC细胞团(下图B)。


综上所述,WOLF G2能准确识别和富集用SSEA-4和TRA- 1-60-R两种表面标记物标记的 hiPSCs,这两种标记物广泛用于标记未分化干细胞。使用WOLF G2可以将样本从69.6%的双阳占比纯化到92.8%,并且纯化后的细胞活率高于99%。这表明WOLF G2 对神经科学和疾病建模等干细胞相关应用的科研工作很有帮助。WOLF G2 能温和地分选和识别如此苛刻和脆弱的细胞类型,也证明了它的高度实用性。