案例应用丨WOLF G2单细胞柔性分选系统分析和富集植物原生质体

发布日期:2024-09-23




植物生物学的科研内容包括基因表征和功能、蛋白质组学和转录组学、单细胞基因组学、通过基因工程/CRISPR-Cas9编辑改进细胞系开发以及育种等,这些工作流程需要通过温和的细胞分选方法进行原生质体的分离。





传统流式分选仪会给样品极高的压力、剪切应力、减压冲击和渗透变化等,这会损坏原生质体,使其无法用于下游应用,因此用传统液滴细胞分选仪分选植物原生质体具有挑战性,会浪费许多珍贵的样本。传统细胞分选仪还限制了鞘液的使用,通常只能使用PBS或者其他的指定缓冲液,而这些缓冲液对于在分选期间和分选后原生质体的活性至关重要。


WOLF微流控柔性细胞分选系统采用温和的分选原理(< 2 psi)和低剪切应力,能有效地单细胞或富集分选目标细胞,并且支持使用培养基作为鞘液来更大程度的保留细胞活力。本文展示了WOLF在分选原生质体上的应用,它成功分离出番茄叶肉细胞原生质体,并显著提高了分选后的存活率。


实验流程

分析预分选样品时,可以看到游离叶绿体,这表明细胞已经裂解(下图)。分选后,样品中则多为未损坏的原生质体。WOLF的低压分选(< 2 psi)与使用原生质体培养基作为鞘提供了成功选的环境。



下图中的显微镜检图片展示了成功分选的原生质体不同组群。高叶绿素和低叶绿素原生质体群体的大小范围相同:30-50 微米;而叶绿体则小得多,约为 10 微米。下图中,图A为分选前的样本,B为分选出的含高叶绿素的原生质体,C为分选出的含低叶绿素的原生质体,D为分选出的叶绿体。




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