案例应用丨使用质量光度法测定核酸

在本文中，将概述如何应用MP测量核酸，并展示了从较短DNA链到整个质粒的DNA的样本测量示例。

DNA和RNA在溶液中都带负电荷，它们会被未经处理的盖玻片排斥。因此，核酸检测显示出不频繁的瞬时结合，这导致MP数据中的事件数量少且定义不清，观察到的解除结合与结合一样多（下图蓝色部分）。使用poly-lysine(PLL)简单处理玻片即可避免这种情况的发生，使得检测结果真实可信（下图灰色部分）。

不同分子类型的光学特性（特别是折射率）会有所不同。因此，为了正确地将所测得的对比度与分子质量相关联，应使用已知质量的、与被分析物分子类别相同的混合分子样本进行校准。这些针对不同分子类别的校准结果均显示出对比度与质量之间的普遍线性相关关系，但斜率不同（下图）。与蛋白质的测量类似，市售的标准品（如凝胶电泳用）可用于校准DNA 测量。

为了证明MP测量对核酸的实用性，我们使用了极少量的样品（3 ng）来测定PCR产物的质量和均匀性。测量结果显示，在218 kDa处有一个有效峰，相当于331 bp（下图），与预期长度 335 bp 非常接近。

为了测试能否以类似的精度分析更长的DNA链，我们对质粒pUC18进行了测量（下图）。检测到了约5000 bp的DNA片段和低于1000 bp的较短DNA片段。

综上所述，这次实验证明了质量光度法检测核酸的能力，质量光度法是一种新兴的、快速且先进有效的核酸定量分析技术，可替代现有技术，在几分钟内对极少量样品进行质量测定和纯度评估，且无需使用任何染色剂。